¿Qué es Cromatografía y para que sirve?

¿Que es la cromatografía?

La cromatografía, nació como una técnica separativa y se desarrollo más tarde también como una técnica analítica, se basa en el hecho de que los diversos componentes de una mezcla tienden a compartir de forma diferente entre dos fases, como una función de su afinidad con cada uno de ellos .La cromatografía se atribuye a la bioquímico ruso Mikhail Cvet en 1906, cuando con esta técnica, pudo separar la clorofila a partir de un extracto de la planta.

cromatografia simple

Como se descubrió la cromatografía

cromatografía en papel

Cvet procedió colocando una pequeña cantidad de extracto en la parte superior de una columna de vidrio llena de polvo de carbonato de calcio y posteriormente lavó la muestra mediante filtración a través de la columna de éter de petróleo. A medida que fluía el éter de petróleo, arrastrando la muestra con él, se separó en bandas de diferentes colores (de ahí el nombre de «cromatografía»), cada una de las cuales avanzó hacia el fondo de la columna con diferentes velocidades.

Con el experimento anterior, Cvet destacó la posibilidad de utilizar este sistema de fraccionamiento, creando la base de la cromatografía moderna. El término se refiere a la separación de bandas de diferentes colores y todavía se usa hoy en día, aunque la separación rara vez se basa en la diferencia cromática. De hecho, esta técnica se aplica hoy en día al análisis de incluso sustancias incoloras, utilizando la transferencia entre las fases con procedimientos y equipos más elaborados que pueden tener una complejidad considerable.

Diferentes fases un cromatografía

Mientras una fase permanece fija (la fase estacionaria ), y generalmente es un sólido o un gel, otra fase, líquida o gaseosa, (la fase móvil ) fluye sobre ella arrastrando con ella en mayor cantidad los componentes de la mezcla que más son similares a ella.

Cromatografía en la actualidad

Hoy en día, el término cromatografía generalmente indica todas las diversas técnicas de separación, aplicables a mezclas de sustancias y basadas en la distribución entre dos fases en las que se usa el mismo principio, la diferente velocidad con la que los diferentes componentes de una mezcla migran en una fase. estacionario bajo la influencia de una fase móvil, que tiene la tarea de arrastrar a lo largo del sistema los solutos que forman la mezcla bajo examen.

¿Que es un Cromatograma?

Cuando el detector ubicado en la parte inferior del dispositivo registra el paso de una sustancia diluida, procesa los datos en un cromatograma. Cada vez que se revela una sustancia, el cromatograma registra un pico más o menos alto dependiendo de su concentración. Para que un cromatograma se considere aceptable, debe tener una buena resolución. Por resolución entendemos un parámetro que relaciona eficiencia, selectividad y factor de retención.

cromatografo

 

☑️ Selectividad : para tener una buena selectividad, los picos del cromatograma deben estar lo más separados posible, es decir, las sustancias de diferentes especies deben tener diferentes tiempos de retención. Por tiempo de retención de una sustancia se entiende el tiempo que tarda el eluyente (es decir, la fase móvil) en arrastrarla fuera de la fase fija. Es posible mejorar la selectividad disminuyendo la temperatura de trabajo.

 

☑️ Eficiencia : tener buena selectividad no es suficiente. De hecho, incluso si los picos están bien espaciados, es posible que sean tan anchos que se superpongan entre sí. Para esto es necesario que las partículas de la misma especie se eluyen con la misma velocidad, de modo que la banda dentro de la columna cromatográfica sea lo más estrecha posible. Existen varias teorías sobre cómo se puede mejorar la eficiencia. La más común se llama «Teoría de los platos teóricos». Esto se refiere al método de destilación fraccionada, en el que un mayor número de platos permite una mejor separación entre sustancias de mayor ebullición con sustancias de menor ebullición.

☑️ Factor de retención : es un parámetro que relaciona el tiempo de retención de un analito con el «tiempo muerto», es decir, el tiempo que toma una sustancia no retenida por la fase estacionaria para cruzar la columna.

Tipos de cromatografía

Desde el primer experimento de Cvet, la técnica ha evolucionado extremadamente. Hoy existen varios tipos de cromatografía, generalmente clasificados de acuerdo con la naturaleza de las fases estacionarias y móviles. La siguiente tabla resume algunos de ellos.

 

especiefase estacionariafase móvil
cromatografía de gases ( GC )sólido o líquido soportado en sólidogas
cromatografía líquida ( LC )sólidolíquido
cromatografía en capa fina ( TLC ) [1]sólidolíquido
cromatografía de intercambio iónico ( IEC )sólidolíquido

Dentro de las categorías anteriores puede tener más subdivisiones. En particular, La cromatografía líquida se divide en cromatografía líquida de alta presión (HPLC).  La cromatografía líquida clásica (utilizada con fines preparatorios); También hay una subdivisión adicional basada en el mecanismo de separación: de hecho, se distinguen la cromatografía de afinidad, la cromatografía de adsorción, la cromatografía iónica, así como la cromatografía de permeación en gel (utilizada en la separación de polímeros de acuerdo con su peso molecular).

Electrocromatografía

Tomando ventaja de un campo eléctrico aplicado a 90 ° con respecto al flujo de disolvente, representa una variante más práctico y más rápido que la cromatografía líquida clásica en el papel. La separación se realiza en sentido descendente y se obtienen caminos divergentes, de arriba a abajo, comenzando desde el punto de siembra.